EZ-Glutathione assay kit

(GSH/GSSG, Total) Colorimetric / Oxidative Stress assay kit

Description

Tri-Peptide (γ-glutamyl cysteinyl glycine)인 Free Thiol-Group을 가지는 환원형 글루타티온(Reduced glutathione, GSH)은 glutathione peroxidase(GPx)에 의해 물과 알코올을 과산화물(Hydrogen peroxide)과 지질 과산화물(Lipid hydroperoxide)로 분해하는 반응에 관여하며, 인체 조직에서 중요하게 작용하는 산화 방지제(antioxidant)로 알려져 있습니다. 이 반응에서 GSH는 산화된 글루타티온(Oxidized glutathione, GSSG)으로 변화하게 되며, 변화된 GSSG는 glutathione reductase (GR)과 β-nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH)에 의해 GSH로 환원 됩니다. 

동물 세포가 산화적 스트레스(oxidative stress)에 노출 되면, GSSG가 축적되고 상대적으로 GSH/GSSG의 비율은 감소합니다. 이때 측정되는 GSSG 양이나 GSH/GSSG 비율은 산화적 스트레스를 측정할 수 있는 정확한 지표로 사용될 수 있으며, 산화적 스트레스 조절 효과를 모니터링 하는 실험에서 효과적으로 사용할 수 있습니다.

조직 내에서 GSSG의 양은 매우 적게 존재하고 GSSG를 측정하기 위한 준비 과정에서 GSSG에서 GSH로 산화되는 것을 막을 수 있는 효과적인 방법이 없기 때문에 GSSG의 측정은 매우 어렵습니다. GSSG를 측정하기 위하여 GSH를 제거하기 위해 N-ethylmaleimide(NEM)가 처음으로 발견 되었습니다. 하지만 NEM은 GSH와 반응하여 안정한 복합체 형성을 하는 반면, GR(Glutathione Reductase)과 일어나는 효소적 반응을 저해하는 단점을 가집니다. 이러한 단점을 개선한 물질로 GR을 저해하지 않고, GSH를 형성할 수 있는 2-vinylpyridine(2-VP)를 발견 되었습니다. 그러나 2-VP 반응은 비교적 느리게 일어나며, 수용성 용매와는 낮은 용해성을 가지는 단점이 가지고 있습니다. 

EZ-Glutathione(GSH/GSSG, Total) Assay Kit는 thiol-scavenging reagent인 1-methyl-2-vinylpyridinium trifluoromethanesulfonate1 (M2VP)를 사용하여 기존 물질들의 단점을 보완하며, 짧은 반응 시간에 GSH를 Masking, GR과의 반응을 방해하지 않아 정확한 측정이 가능한 제품입니다.

Product details

Data

Fig. Detection mechanism with EZ-Glutathione assay kit

 GSSG 측정은 GSH를 GSSG로 환원 시킨 후,

Ellman’s reagent(5,5′- dithiobis-2-nitrobenzoic acid, DTNB)와 반응하여 측정합니다.

EZ-Glutathione(GSH/GSSG, Total) Assay Kit는 반응 동안 일어나는 색의 변화를 측정하며,

이러한 색의 변화는 GSH와 GSSG의 농도 변화에 비례하며 일어납니다.

                             – GSH_t : A₄₁₂ = 0.123 x Minutes + 0.205 (r² 값 = 0.999) 이기 때문에 GSH_t Sample의 값은 0.123 A₄₁₂/min이 됩니다.

                             – GSSG : A₄₁₂ = 0.024 x Minutes + 0.120 (r² 값 = 1.000) 이기 때문에 GSSG Sample의 값은 0.024 A₄₁₂/min이 됩니다.

                             – GSH Blank : A₄₁₂ = 0.008 x Minutes + 0.103 (r² 값 = 0.999) 이기 때문에 GSH Blank 값은 0.008 A₄₁₂/min이 됩니다.